實(shí)驗(yàn)案例
2020/12/21 12:03:21
研磨儀搭配植物RNA快速提取試劑盒提取雞肉組織總RNA
來(lái)源：上海凈信
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>快速提取動(dòng)物組織中的總RNA(18S,28S；離心吸附柱不吸附5S)
二、實(shí)驗(yàn)器材及試劑：研磨儀，離心管，移液槍?zhuān)娪静勰z成像等；無(wú)水乙醇，液氮，瓊脂糖。
三、實(shí)驗(yàn)材料：雞肉組織。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1）雞肉組織
2）鮮組織用解剖刀迅速切成小碎離心管中，加入小號(hào)研磨珠，將管子蓋嚴(yán)后放入液氮中冷凍，設(shè)置參數(shù)，點(diǎn)擊運(yùn)行即可開(kāi)始研磨。
3）取適量組織細(xì)粉轉(zhuǎn)入裝有組織裂解液RLT的離心管中,用手劇烈振蕩若干秒，充分裂解。用帶鈍針頭的一次性注射器抽打裂解物若干次或直到得到滿(mǎn)意勻漿結(jié)果(或者電動(dòng)勻漿若干秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高產(chǎn)量。
4）將勻漿后裂解物離心,沉淀可能存在的裂解困難的碎片或者不溶物,將裂解物上清小心轉(zhuǎn)到一個(gè)新離心管。
5）接操作步驟項(xiàng)下3。
6）較精確估計(jì)裂解物(上清)體積,加入等體積的乙醇（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!）,此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀,但是不影響提取過(guò)程,立即吹打混勻,不要離心。
7）立刻將混合物加入一個(gè)吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）離心60秒，棄掉廢液。
8）加去蛋白液RW1，室溫放置幾秒，離心30秒，棄掉廢液。
9）如果DNA殘留明顯,可在加入RW1后室溫放置幾分鐘再離心。
10）加入漂洗液RW（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!），離心30秒，棄掉廢液。加入漂洗液RW,重復(fù)一遍。
11）將吸附柱RA放回空收集管中離心2分鐘，盡量除去漂洗液,以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
12）取出吸附柱RA，放入一個(gè)RNase free離心管中，根據(jù)預(yù)期RNA產(chǎn)量在吸附膜的中間部位加30-50μl RNase free water，室溫放置1分鐘，離心1分鐘。
13）如果預(yù)期RNA產(chǎn)量>30μg,加30-50μl RNase free water重復(fù)步驟8,合并兩次洗脫液,或者使用第一次的洗脫液加回到吸附柱重復(fù)步驟一遍(如果需要RNA濃度高)。
14）洗脫兩遍的RNA洗脫液濃度高,分兩次洗脫合并洗脫液的RNA產(chǎn)量比前者高15–30%,但是濃度要低,用戶(hù)根據(jù)需要選擇。
五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：提取的雞肉組織RNA點(diǎn)樣量為1ul，雞肉組織RNA兩個(gè)條帶亮度相當(dāng)，提示出現(xiàn)降解。
