實(shí)驗(yàn)案例
2026/1/27 9:30:43
流式分析通關(guān)指南：單細(xì)胞懸液制備儀才是隱藏的勝負(fù)手
來源：上海凈信
做過流式的人都懂一個(gè)殘酷真相：儀器再精密、抗體再昂貴，若樣本沒處理好，所有努力都是白費(fèi)。而這其中的核心關(guān)鍵，就是單細(xì)胞懸液的制備質(zhì)量。為什么它如此重要？流式細(xì)胞儀的檢測原理是讓細(xì)胞逐個(gè)通過激光檢測區(qū)，通過散射光和熒光信號(hào)分析細(xì)胞特性。一旦出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)塊，會(huì)導(dǎo)致：
1、信號(hào)疊加誤判：兩個(gè)細(xì)胞粘在一起會(huì)被誤讀為“巨型細(xì)胞”，直接擾亂數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性；
2、管路堵塞風(fēng)險(xiǎn)：團(tuán)塊可能卡住儀器進(jìn)樣系統(tǒng)，不僅中斷實(shí)驗(yàn)，還會(huì)損傷昂貴的檢測設(shè)備；
3、假陽性干擾：細(xì)胞碎片和死細(xì)胞會(huì)非特異性結(jié)合抗體，讓陽性率計(jì)算嚴(yán)重失真。
10X Genomics的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)單細(xì)胞懸液的聚團(tuán)率超過10%時(shí)，下游分析的細(xì)胞分群準(zhǔn)確率會(huì)下降40%以上；而活率低于80%的樣本，幾乎無法獲得可靠的免疫表型結(jié)果。一句話總結(jié)：高質(zhì)量懸液是流式分析的“入場券”。
一、效率與質(zhì)量雙保障：儀器制備單細(xì)胞懸液的核心優(yōu)勢
傳統(tǒng)手工制備單細(xì)胞懸液（如手動(dòng)研磨、離心分離）高度依賴實(shí)驗(yàn)人員經(jīng)驗(yàn)，不僅耗時(shí)費(fèi)力，還容易因操作差異導(dǎo)致懸液質(zhì)量不穩(wěn)定，成為流式分析的“隱形瓶頸”。而專用儀器制備方案，通過標(biāo)準(zhǔn)化流程和精準(zhǔn)調(diào)控，從根本上解決了這些痛點(diǎn)，核心優(yōu)勢體現(xiàn)在以下4個(gè)方面：
01、標(biāo)準(zhǔn)化操作，規(guī)避人為誤差
手工制備時(shí)，研磨力度、離心速度控制、酶解時(shí)間判斷等環(huán)節(jié)均依賴個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，不同人操作、甚至同一人不同批次操作，都可能出現(xiàn)顯著差異。而儀器制備通過預(yù)設(shè)程序，將轉(zhuǎn)速、溫度、酶解時(shí)間、振蕩頻率等關(guān)鍵參數(shù)精準(zhǔn)固定，實(shí)現(xiàn)“一鍵式”標(biāo)準(zhǔn)化處理。例如某品牌組織解離儀，可針對(duì)不同樣本預(yù)設(shè)專屬程序，確保每一批次懸液的制備條件完全一致，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性提升60%以上，徹底告別“經(jīng)驗(yàn)依賴型”操作。
02、高效解離，兼顧產(chǎn)量和活性
實(shí)體組織的解離是懸液制備的核心難點(diǎn)，手工研磨易導(dǎo)致細(xì)胞破碎（活率低），或研磨不充分（細(xì)胞產(chǎn)量低）。儀器通過“機(jī)械解離+酶解協(xié)同”的精準(zhǔn)調(diào)控，既能高效打破細(xì)胞間連接，又能最大程度保護(hù)細(xì)胞完整性。比如針對(duì)堅(jiān)硬腫瘤組織，儀器可通過梯度式機(jī)械研磨配合溫和酶解體系，在30分鐘內(nèi)完成解離，細(xì)胞產(chǎn)量較手工研磨提升30%-50%，同時(shí)活率穩(wěn)定保持在90%以上；而手工處理同類樣本，不僅耗時(shí)超1小時(shí)，活率還常波動(dòng)在70%-85%之間。
03、批量處理能力，適配高通量需求
科研實(shí)驗(yàn)或臨床檢測中，常需同時(shí)處理多份樣本（如批量臨床血液樣本、多組學(xué)實(shí)驗(yàn)組織樣本）。手工制備單份樣本已需30分鐘以上，批量處理時(shí)效率極低，還容易出現(xiàn)樣本交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。專用制備儀器普遍支持多通道并行處理，一次可完成多份樣本的同步解離、分離、清洗，單樣本處理時(shí)間縮短至10-15分鐘，大幅提升高通量實(shí)驗(yàn)效率。同時(shí)，儀器的密閉式處理通道，能有效避免樣本間交叉污染，保障實(shí)驗(yàn)安全性。
04、精準(zhǔn)控溫，減少細(xì)胞活性損失
細(xì)胞活性是懸液質(zhì)量的核心指標(biāo)，而溫度波動(dòng)是導(dǎo)致細(xì)胞活性下降的重要原因（如手工操作中酶解后降溫不及時(shí)、離心過程中樣本溫度升高）。儀器內(nèi)置精準(zhǔn)控溫系統(tǒng)，可在整個(gè)制備過程中（從樣本導(dǎo)入到懸液收集）將溫度穩(wěn)定控制在37℃的目標(biāo)區(qū)間：酶解階段精準(zhǔn)維持37℃最優(yōu)酶活性溫度，(水產(chǎn)量可設(shè)置較低溫度)減少細(xì)胞代謝損耗和活性損失。
05、適配多樣本類型，兼容性更強(qiáng)
優(yōu)質(zhì)的制備儀器具備強(qiáng)大的樣本適配能力，無論是腫瘤、肝臟、淋巴結(jié)、腦組織等實(shí)體組織，還是貼壁/懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，都能通過儀器上的預(yù)設(shè)程序?qū)崿F(xiàn)高效處理。例如針對(duì)敏感的腦組織樣本，儀器可切換至“腦”程序，通過溫和剪切、雙向機(jī)械切割等替代高強(qiáng)度研磨，在保證解離充分的同時(shí)，減少神經(jīng)元等敏感細(xì)胞受損。
二、避坑指南：懸液制備的關(guān)鍵質(zhì)控點(diǎn)
單細(xì)胞懸液制備儀JX-DLDXB-4
01、組織處理，均勻細(xì)碎是基礎(chǔ)
? 常見問題：剪碎程度不均一，殘留大塊組織，導(dǎo)致消化不完全。
? 關(guān)鍵注意事項(xiàng)：
1、處理組織時(shí)務(wù)必耐心，剪成細(xì)小碎塊并盡量保持大小均一，理想狀態(tài)接近糊狀；
2、若消化后仍有大塊未消化組織，嚴(yán)禁延長消化時(shí)間硬懟！正確操作是：先過濾細(xì)胞懸液，將剩余大塊組織重新剪碎，補(bǔ)加適量酶后繼續(xù)消化，效率更高且不損傷細(xì)胞。
大塊組織剪碎前后對(duì)比圖
02、酶液用量：精準(zhǔn)配比不隨意
? 常見問題：酶液添加過少，導(dǎo)致消化不充分，盲目延長時(shí)間反而降低細(xì)胞活率。
? 關(guān)鍵注意事項(xiàng)：
嚴(yán)格遵循說明書配比：我司1 mL 解離酶可消化 50~150 mg 組織；酶液不足時(shí)，延長消化時(shí)間無濟(jì)于事，反而會(huì)讓已消化的細(xì)胞長時(shí)間處于酶解環(huán)境中，造成損傷、活率下降，務(wù)必按需足量添加。
03、去碎片劑使用：順序和混勻是關(guān)鍵
? 常見問題：直接將去碎片劑加入沖懸液
? 注意事項(xiàng)：操作錯(cuò)誤！正確步驟是：先加 PBS，再加入去碎片試劑，隨后充分混勻，避免直接加試劑影響效果。
? 常見問題2：碎片去不干凈或細(xì)胞沉淀過少
去碎片前后效果圖
?注意事項(xiàng)：
1、加入 PBS 和去碎片劑后，需用移液槍反復(fù)吹打充分混勻，否則難以有效去除碎片；
2、離心參數(shù)要精準(zhǔn)：建議使用 500-800g 離心力；低于 500g 易導(dǎo)致細(xì)胞沉淀少，高于 800g 則難以徹底去除碎片。
好懸液=成功的80%，儀器賦能讓實(shí)驗(yàn)更高效
流式分析就像精準(zhǔn)射擊，單細(xì)胞懸液就是那顆“子彈”——子彈不合格，再精準(zhǔn)的槍也打不中靶心。而儀器制備方案，通過標(biāo)準(zhǔn)化、高效化、精準(zhǔn)化的優(yōu)勢，為高質(zhì)量懸液的制備提供了穩(wěn)定保障，不僅降低了實(shí)驗(yàn)門檻，更讓流式分析的準(zhǔn)確性和重復(fù)性邁上新臺(tái)階。
如果你的實(shí)驗(yàn)中也面臨特殊樣本（如堅(jiān)硬腫瘤、敏感組織）的懸液制備難題，或者想了解不同品牌制備儀器的選型技巧，歡迎聯(lián)系凈信，一起交流解決方案！
