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2025/3/12 12:54:50

超聲法與酶切法(打斷基因組的方法)比較|超聲波DNA打斷儀

來源:上海凈信

將細菌基因組打斷,是構建文庫的第一步,也是構建多樣文庫的一個重要保障。超聲波和酶切法是兩種常用的斷裂基因組的方法。

下面我們看一下分別用超聲波和酶切法打斷“布魯菌16M株”基因組的效果圖。

對比效果展示

調整超聲時間,打斷結果圖

基因組打斷效果檢測分析

基因組打斷效果檢測分析:為了建立布魯菌基因組隨機文庫,通過用Sau3AI 酶切和超聲破碎基因組,得到想要的基因片段,為后續試驗做準備。所需基因片段小于500 bp,片段均勻,大小適中(通過調整不同參數,確定最佳參數)。而通過電泳檢測可知, 酶切法得到的基因片段大多數都是小片段,超聲法得到的片段為一條抹帶,符合后續試驗需要。

超聲法對DNA的打斷是隨機的,且實驗重復性較高。對于那些與DNA結合不緊密的蛋白或低豐度表達的蛋白,如調控因子、轉錄因子等通常需要用交聯試劑固定樣本 ( 細胞或組織) 以穩定蛋白質和DNA的形態,這種情況最好用超聲法。如果樣本無需交聯,例如研究對象是與DNA 結合緊密的蛋白或高豐度表達的蛋白,那么便可以使用酶法。但酶切法得到的DNA片段相對較短,不適合染色質免疫共沉淀技術及與芯片方法的結合(CHIP-Chip) 實驗和染色質免疫沉淀測序(CHIP-Seq) 實驗。

超聲波DNA打斷用到的儀器

超聲波DNA打斷儀采用等溫非接觸的方式對樣品進行打斷、勻漿和混合。用于無菌、可超微量破碎,隔著離心管能打斷染色體。專為二代測序DNA樣本與染色質免疫共沉淀實驗樣本前處理量身訂做。相比傳統的探頭超聲波破碎儀,探頭與樣品直接接觸,一次只能處理一個樣品,實驗周期長。對于多個樣品,需要重復使用同一探頭,容易造成樣品交叉污染。非接觸式樣品可在密閉容器下進行破碎,不產生感染性飛霧,超聲探頭與樣品不接觸,避免交叉污染。對于每天要處理多個樣品或者貴重樣品的實驗室。

非接觸超聲波DNA破碎儀具有處理高通量,樣本低損耗,無交叉污染等優勢。逐漸成為ChiP(染色質免疫共沉淀)和DNA剪切研究平臺不可缺少的標準化工具。

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